大鼠α1微球蛋白（α1-MG）試劑盒使用說明書

大鼠α1微球蛋白（α1-MG）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍：                                                                                                                    96T
20ng/L - 480ng/L 
使用目的：
本試劑盒用於測定大鼠血清、 血漿、 尿液及相關液體樣本中α1-微球蛋白（α1-MG）含量。 
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中大鼠α1-微球蛋白（α1-MG）水平。 用純化的大鼠
α1-微球蛋白（α1-MG）抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入α1-
微球蛋白（α1-MG），再與 HRP 标記的α1-微球蛋白（α1-MG）抗體結合，形成抗體-抗原-酶
标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，
並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的α1-微球蛋白（α1-MG）呈正相
關。用酶标儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過标準曲線計算樣品中大鼠α1-微
球蛋白（α1-MG）濃度。  
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶标試劑  6ml×1瓶  8  标準品（960ng/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶标包被闆  12 孔×8條  9  标準品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封闆膜  2 張    
6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
标本要求  
1．标本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
大鼠α1微球蛋白（α1-MG）試劑盒操作步驟
1.  标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
480ng/L  5 号标準品  150µl的原倍标準品加入150µl标準品稀釋液
240ng/L  4 号标準品  150µl的5 号标準品加入150µl标準品稀釋液
120ng/L  3 号标準品  150µl的4 号标準品加入150µl标準品稀釋液
60ng/L  2 号标準品  150µl的3 号标準品加入150µl标準品稀釋液
30ng/L  1 号标準品  150µl的2 号标準品加入150µl标準品稀釋液
 2.  加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同） 、标準孔、待測樣品孔
。 在酶标包被闆上标準品準確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然後再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。      
4.  配液：将30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋後備用
5.  洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹
，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此
重複 5次，拍幹。
6.  加酶：每孔加入酶标試劑50µl，空白孔除外。  
7.  溫育：操作同3。
8.  洗滌：操作同5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鍾.
10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11.  測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止
液後 15分鍾以内進行。
大鼠α1微球蛋白（α1-MG）試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用，酶标包被闆開封後如未
用完，闆條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果
。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做标準曲線，做複孔。如标本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大於标準品孔*孔的OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計
算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5） 。
5． 封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批号組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書爲準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6個月