大鼠β内啡肽(β-EP)試劑盒使用說明書

大鼠β内啡肽(β-EP)試劑盒使用說明書

本試劑(jì)盒僅(jǐn)供研究使用。

檢測(cè)範(fàn)圍：                                              96T

50pg/ml- 1600pg/ml

 使用目的：

本試劑盒用於(yú)測(cè)定大鼠血清、血漿及相關液體樣本β内啡肽(β-EP)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中大鼠β内啡肽(β-EP)水平
。用純(chún)化的大鼠β内

啡肽(β-EP)抗體(tǐ)包被微孔闆，制成固相抗體(tǐ)，往包被單(dān)抗的微孔中依次加入β内啡肽(β

-EP)，再與 HRP 标記的β内啡肽(β-EP)抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物，經過(guò)

*洗滌(dí)後加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化

成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的β内啡肽(β-EP)呈正相關(guān)。用酶标儀在 450nm 波長(zhǎng)

下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)标準曲線計算樣品中大鼠β内啡肽(β-EP)濃度。   

試劑盒組成   

1  30 倍濃(nóng)縮洗滌(dí)液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

2  酶标試(shì)劑(jì)  6ml×1瓶  8  标準品(3200pg/ml)  0.5ml×1 瓶

3  酶标包被闆  12 孔×8條(tiáo)  9  标準品稀釋(shì)液  1.5ml×1 瓶

4  樣品稀釋(shì)液  6ml×1瓶  10  說明書(shū)  1 份

5  顯(xiǎn)色劑(jì)A 液  6ml×1瓶  11  封闆膜  2 張     

6  顯色劑(jì)B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(gè)

标本要求   

1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可将标本放於(yú)-20℃保存，但應避免反複凍(dòng)融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

1.  标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋
。

1600pg/ml  5 号标準(zhǔn)品  150µl的原倍标準(zhǔn)品加入150µl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液

800pg/ml  4 号标準(zhǔn)品  150µl的5 号标準(zhǔn)品加入150µl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液

400pg/ml  3 号标準(zhǔn)品  150µl的4 号标準(zhǔn)品加入150µl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液

200pg/ml  2 号标準(zhǔn)品  150µl的3 号标準(zhǔn)品加入150µl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液

100pg/ml  1 号标準(zhǔn)品  150µl的2 号标準(zhǔn)品加入150µl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液

 2.  加樣：分别設空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同) 、标準孔、

待測樣品孔。 在酶标包被闆上标準品準確(què)加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然後再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度爲5倍)。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡

量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.  溫(wēn)育：用封闆膜封闆後(hòu)置37℃溫(wēn)育30分鍾。       

4.  配液：将30 倍濃縮洗滌(dí)液用蒸餾水30 倍稀釋後備(bèi)用

5.  洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹(gàn)，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置 30 秒後棄去，如此

重複 5次，拍幹。

6.  加酶：每孔加入酶标試(shì)劑(jì)50µl，空白孔除外。   

7.  溫(wēn)育：操作同3。

8.  洗滌(dí)：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑(jì)A50µl，再加入顯色劑(jì)B50µl，輕輕震蕩(dàng)混勻，37℃避光顯色

15 分鍾.

10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(此時藍(lán)色立轉黃(huáng)色) 。

11.  測(cè)定：以空白空調零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值) 。 測(cè)定應在加終止

液後(hòu) 15分鍾以内進(jìn)行
。

1．試劑盒從(cóng)冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開封後(hòu)如未

用完，闆條(tiáo)應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌(dí)液可能會(huì)有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(dí)時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5 分鍾内，如标本數量多，推薦(jiàn)使用排槍(qiāng)加樣。

4． 請每次測(cè)定的同時做标準曲線，做複(fù)孔。如标本中待測(cè)物質含量過高(樣本OD 值

大於(yú)标準品孔*孔的OD 值) ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測(cè)定，計

算時請(qǐng)zui後(hòu)乘以總稀釋倍數(×n×5) 。

5． 封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶标儀讀(dú)數爲準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。

9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。

10.  如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)爲準。

保存條件及有效期

1．試(shì)劑(jì)盒保存： ；2-8℃。

2．有效期：6個月