小鼠25羟維生素D3實驗原理

小鼠25羟維生素D3（25（OH）D3）酶聯免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍： 96T
0.3μg/L -12μg/L

使用目的：
本試劑盒用於測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中25羟維生素D3（25（OH）D3）含量。
小鼠25羟維生素D3試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中小鼠25羟維生素D3（25（OH）D3）水平。用純化的小鼠25羟維生素D3（25（OH）D3）抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入25羟維生素D3（25（OH）D3），再與HRP标記的25羟維生素D3（25（OH）D3）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的25羟維生素D3（25（OH）D3）呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中小鼠25羟維生素D3（25（OH）D3）濃度。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶标試劑 6ml×1瓶 8 标準品（24μg/L） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被闆 12孔×8條 9 标準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封闆膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
小鼠25羟維生素D3試劑盒标本要求
1．标本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠25羟維生素D3試劑盒操作步驟
1. 标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
12μg/L 5号标準品 150μl的原倍标準品加入150μl标準品稀釋液
6μg/L 4号标準品 150μl的5号标準品加入150μl标準品稀釋液
3μg/L 3号标準品 150μl的4号标準品加入150μl标準品稀釋液
1.5μg/L 2号标準品 150μl的3号标準品加入150μl标準品稀釋液
0.75μg/L 1号标準品 150μl的2号标準品加入150μl标準品稀釋液

2. 加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌
：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液
，靜置30秒後棄去，如此重複5次

，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。
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