大鼠轉化生長因子β2試劑盒說明書

大鼠轉化生長因子β2試劑盒檢測原理：
本試劑盒採用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）。将标準品、待測樣本加入到預先包被大鼠轉化生長因子β2（TGF-β2）單克隆抗體透明酶标包被闆中，溫育足夠時間後，洗滌除去未結合的成分，再加入酶标工作液，溫育足夠時間後，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化爲藍色産物，在酸的作用下變成黃色，顔色的深淺與樣品中大鼠轉化生長因子β2（TGF-β2）濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值，根據标準品和樣品的OD值，計算樣本中大鼠轉化生長因子β2（TGF-β2）含量。
大鼠轉化生長因子β2試劑盒操作步驟：
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫複溫平衡30分鍾
。
2、配液：用蒸餾水将20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加标準品和待測樣本：取足夠數量的酶标包被闆
，固定於框架上，分别設置标準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在标準品孔中加入标準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗闆：棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗闆4次（也可用洗闆機按說明書操作洗闆）。
6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、洗闆：棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗闆4次（也可用洗闆機按說明書操作洗闆）。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，平闆混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶标闆，每孔加終止液50μL，終止反應（顔色由藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白孔調零，在終止後15分鍾内，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據标準品的濃度及對應的OD值，計算出标準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度爲實際測定濃度乘以稀釋倍數。
大鼠轉化生長因子β2試劑盒注意事項：
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準。
2、酶标包被闆開封後如未用完，應立即裝入密封袋中加幹燥劑保存。
3、建議所有的标準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量範圍爲5-160pg/mL，超過此範圍，爲标準曲線延伸計算所得，不做爲準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋後測定準確結果（5-160pg/mL範圍内），乘以總稀釋倍數即爲樣本zui終濃度。
6、若顯色過淺，可适當延長底物溫育時間。
7、爲避免交叉污染，标準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶标工作液
、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重複使用封闆膜。
8、試劑盒保質期内使用，不同批号的試劑不得混用。
9、底物B對光敏感，避免長時間暴露於光下。