人雌二醇（E2）酶聯免疫試劑盒使用說明書

實驗原理

本試劑(jì)盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中人雌二醇（E2）水平。用純化的人雌二醇（E2）抗體(tǐ)包被微孔闆，制成固相抗體(tǐ)，往包被單(dān)抗的微孔中依次加入雌二醇（E2），再與HRP标記的雌二醇（E2）抗體結合
，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物
，經過*洗滌(dí)後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成zui終的黃(huáng)色。顔色的深淺和樣品中的雌二醇（E2）呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過(guò)标準曲線計(jì)算樣品中人雌二醇（E2）濃度。 

試劑盒組成

标本要求

1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢(jiǎn)測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.         标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

  2.         加樣：分别設空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同）、标準孔
、待測(cè)樣品孔
。在酶标包被闆上标準品準確(què)加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋(shì)液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.         溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。  

4.         配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

5.         洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹(gàn)，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置30秒後棄去
，如此重複5次，拍幹
。

6.         加酶：每孔加入酶标試(shì)劑(jì)50μl，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍(lán)色立轉黃(huáng)色）。

11.     測定：以空白空調零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。

注意事項

1．試劑盒從(cóng)冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開(kāi)封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌(dí)液可能會(huì)有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(dí)時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鍾内，如标本數量多，推薦(jiàn)使用排槍(qiāng)加樣。

4．  請每次測(cè)定的同時做标準曲線，做複(fù)孔。如标本中待測(cè)物質含量過高（樣本OD值大於标準品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋(shì)液稀釋(shì)一定倍數（n倍）後(hòu)再測(cè)定，計算時請zui後(hòu)乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．  封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶标儀讀(dú)數爲準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。

9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。

10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)爲準。