人激肽釋放酶8elisa試劑盒使用說明書

人激肽釋放酶8elisa試劑盒使用說明書
　　Elisakit規格：48孔配置/96孔配置
　　标準品稀釋液：1.5ml×1瓶
　　酶标試劑：3ml×1瓶（48）/6ml×1瓶（96）　　
　　【人激肽釋放酶8（KLK8）elisa試劑(jì)盒】本試劑(jì)僅(jǐn)供研究使用　　
　　計算
：　　
　　以标準物的濃(nóng)度爲橫(héng)坐标，OD值爲縱坐标，在坐标紙上繪(huì)出标準曲線，根據(jù)樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃(nóng)度；再乘以稀釋(shì)倍數；或用标準物的濃(nóng)度與OD值計算出标準曲線的直線回歸(guī)方程式，将樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即爲樣品的實際濃度。　　　　試劑(jì)盒組成：　　
　　封闆膜:2片（48）/2片（96）　　
　　說明書:1份　　
　　密封袋:1個　　
　　标準品：2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存　　
　　酶标包被闆:1×481×962-8℃保存　　
　　樣品稀釋液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存　　
　　顯色劑A液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存　　
　　顯色劑B液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存　　
　　終止液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存　　
　　濃縮洗滌液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存　　
　　實驗原理：　　
　　本試劑(jì)盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中人激肽釋放酶8（KLK8）水平。用純(chún)化的人激肽釋(shì)放酶8（KLK8）抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單(dān)抗的微孔中依次加入激肽釋(shì)放酶8（KLK8），再與HRP标記(jì)的激肽釋(shì)放酶8（KLK8）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物，經過*洗滌(dí)後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成zui終的黃(huáng)色。顔色的深淺和樣品中的激肽釋放酶8（KLK8）呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過(guò)标準曲線計(jì)算樣品中人激肽釋放酶8（KLK8）濃度。　　
　　目的
：本試劑盒用於(yú)測(cè)定讓人血清，血漿及相關液體樣本中激肽釋放酶8（KLK8）的含量。　　
　　服務承諾：　　
　　供貨期：款到發貨。　　
　　工作時間内免費(fèi)的技術咨詢和指導(dǎo)。請　　
　　爲客戶(hù)提供來樣檢測(cè)服務，zui大限度實驗結果的有效性（免費代測）。　　
　　保存條(tiáo)件及有效期：　　
　　試劑盒保存：2-8℃|有效期
：6個月　　
　　【人激肽釋放酶8（KLK8）elisa試劑(jì)盒】樣本處(chù)理及要求

：　　
　　1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鍾，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉澱(diàn)，應再次離心。　　
　　2.血漿(jiāng)：應根據(jù)标本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作爲抗凝劑(jì)，混合10-20分鍾後(hòu)，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱(diàn)形成，應該(gāi)再次離心。　　
　　3.尿液：用無(wú)菌管收集，離(lí)心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱(diàn)形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參(cān)照實行。　　
　　4.細胞培養上清：檢(jiǎn)測(cè)分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測(cè)細胞内的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反複凍(dòng)融，以使細胞破壞並(bìng)放出細胞内成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉澱(diàn)形成，應再次離心。　　
　　5.組織标本：切割标本後(hòu)，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍(dòng)保存備(bèi)用。标本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿(jiāng)器将标本勻漿(jiāng)充分。離(lí)心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測(cè)，其餘冷凍備(bèi)用
。　　
　　6.标本採集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於(yú)-20℃保存，但應避免反複(fù)凍(dòng)融.　　
　　7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。　　
　　人激肽釋放酶elisa試劑盒操作步驟　　
　　1.标準品的稀釋(shì)與加樣：在酶标包被闆上設(shè)标準品孔10孔，在*、第二孔中分别加标準(zhǔn)品100μl，然後(hòu)在*、第二孔中加标準品稀釋(shì)液50μl，混勻；然後(hòu)從(cóng)*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标準(zhǔn)品稀釋(shì)液50μl，混勻(yún)；然後(hòu)在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标準(zhǔn)品稀釋(shì)液50ul，混勻；混勻後(hòu)從(cóng)第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标準(zhǔn)品稀釋(shì)液50μl，混勻後(hòu)從(cóng)第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标準(zhǔn)品稀釋(shì)液50μl，混勻後(hòu)從(cóng)第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋後各孔加樣量都爲50μl，濃度分别爲1800ng/L，1200ng/L，600ng/L，300ng/L，150ng/L）。　　
　　2.加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試(shì)劑(jì)，其餘各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶标包被闆上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋(shì)液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部
，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混勻。　　
　　3.溫(wēn)育：用封闆膜封闆後(hòu)置37℃溫育30分鍾。　　
　　4.配液：将30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用。　　
　　5.洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹(gàn)，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。　　
　　6.加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。　　
　　7.溫育：操作同3。　　
　　8.洗滌：操作同5。　　
　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.　　
　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。　　
　　11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液後15分鍾以内進行。　　
　　人激肽釋放酶elisa試劑盒注意事項：　　
1．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鍾内
，如标本數量多，推薦(jiàn)使用排槍(qiāng)加樣。　　
2．試劑盒從(cóng)冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開(kāi)封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。　　
3．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶标儀讀(dú)數爲準.