本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用於(yú)測(cè)定大鼠血清，血漿及相關液體樣本中遊離脂肪酸（FFA）的含量 。
本試劑(jì)盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中大鼠遊離脂肪酸（FFA）水平。用純(chún)化的遊離(lí)脂肪酸（FFA）抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單(dān)抗的微孔中加入遊離(lí)脂肪酸（FFA），再與HRP标記的遊離脂肪酸（FFA）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物 ，經過*洗滌(dí)後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色 ，並(bìng)在酸的作用下轉化成zui終的黃(huáng)色 。顔色的深淺和樣品中的遊離脂肪酸（FFA）呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過(guò)标準曲線計(jì)算樣品中大鼠遊離脂肪酸（FFA）的含量 。
大鼠遊離脂肪酸ELISA試劑盒組成 ：
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置保存
說明書 1份 1份
封闆膜 2片（48） 2片（96）
密封袋 1個 1個
酶标包被闆 1×48 1×96 2-8℃保存
标準品 ：720μmol/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
标準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶标試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存
1. 血清：室溫(wēn)血液自然凝固10-20分鍾 ，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清 ，保存過(guò)程中如出現沉澱(diàn) ，應再次離心。
2. 血漿(jiāng)：應根據(jù)标本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉(nà)作爲抗凝劑(jì) ，混合10-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清 ，保存過程中如有沉澱(diàn)形成，應該(gāi)再次離心。
3. 尿液 ：用無(wú)菌管收集 ，離(lí)心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清 ，保存過程中如有沉澱(diàn)形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參(cān)照實行。
4. 細胞培養上清：檢(jiǎn)測(cè)分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢(jiǎn)測(cè)細胞内的成份時 ，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃(nóng)度達(dá)到100萬/ml左右。通過反複凍(dòng)融，以使細胞破壞並(bìng)放出細胞内成份 。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清 。保存過(guò)程中如有沉澱(diàn)形成 ，應再次離心。
5. 組織标本 ：切割标本後(hòu) ，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍(dòng)保存備(bèi)用 。标本融化後仍然保持2-8℃的溫度 。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿(jiāng)器将标本勻漿(jiāng)充分 。離(lí)心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清 。分裝後一份待檢測(cè) ，其餘冷凍備(bèi)用。
6. 标本採(cǎi)集後盡早進行提取 ，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗 ，可将标本放於(yú)-20℃保存 ，但應避免反複(fù)凍(dòng)融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品 ，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
1. 标準品的稀釋(shì)與加樣：在酶标包被闆上設(shè)标準品孔10孔 ，在*、第二孔中分别加标準(zhǔn)品100μl，然後(hòu)在*、第二孔中加标準品稀釋(shì)液50μl，混勻；然後(hòu)從(cóng)*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔 ，再在第三、第四孔分别加标準(zhǔn)品稀釋(shì)液50μl，混勻(yún)；然後(hòu)在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分别加到第五 、第六孔中 ，再在第五、第六孔中分别加标準(zhǔn)品稀釋(shì)液50ul，混勻；混勻後(hòu)從(cóng)第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标準(zhǔn)品稀釋(shì)液50μl，混勻後(hòu)從(cóng)第七、第八孔中分别取50μl加到第九 、第十孔中 ，再在第九第十孔分别加标準(zhǔn)品稀釋(shì)液50μl，混勻後(hòu)從(cóng)第九第十孔中各取50μl棄(qì)掉 。（稀釋後(hòu)各孔加樣量都爲50μl，濃度分别爲480μmol/L ，320μmol/L ，160μmol/L，80μmol/L，40μmol/L）。
2. 加樣：分别設空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、待測(cè)樣品孔 。在酶标包被闆上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾 。
4. 配液 ：将30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用 。
5. 洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹(gàn)，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹 。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外 。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍(lán)色立轉黃(huáng)色）。
11. 測定：以空白空調零 ，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液後15分鍾以内進行 。
1．試劑盒從(cóng)冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開(kāi)封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存 。
2．濃洗滌(dí)液可能會(huì)有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶 ，洗滌(dí)時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差 。一次加樣時間控制在5分鍾内，如标本數量多，推薦(jiàn)使用排槍(qiāng)加樣。
4．請每次測(cè)定的同時做标準曲線，做複(fù)孔 。如标本中待測(cè)物質含量過高（樣本OD值大於标準品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋(shì)液稀釋(shì)一定倍數（n倍）後(hòu)再測(cè)定，計算時請zui後(hòu)乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染 。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶标儀讀(dú)數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。
9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)爲準。
計算：
以标準物的濃(nóng)度爲橫(héng)坐标，OD值爲縱坐标，
在坐标紙上繪(huì)出标準曲線，根據(jù)樣品的OD
值由标準曲線查出相應的濃(nóng)度；再乘以稀釋(shì)
倍數；或用标準物的濃度與OD值計算出标
準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸(guī)方程式，将樣品的OD值
代入方程式，計(jì)算出樣品濃(nóng)度，再乘以稀釋
倍數，即爲樣品的實際(jì)濃(nóng)度。
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸(guī)與預期濃度相關(guān)系數R值爲0.990以上。
2.批内與批見應分别小於9%和11%
檢測範圍：
25μmol/L -500μmol/L
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
點擊交流