豚鼠輪狀病毒（RV）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒用於測定豚鼠血清、血漿(jiāng)及相關(guān)液體樣本中輪狀病毒（RV）表達。

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中豚鼠輪狀病毒（RV）表達。用純化的豚鼠輪狀病毒（RV）抗體包被微孔闆
，制成固相抗體，可與樣品中輪狀病毒（RV）相結合，經洗滌(dí)除去未結合的抗原和其他成分後(hòu)再與HRP标記的輪狀病毒（RV）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物
，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定标本中豚鼠輪狀病毒（RV）的存在與否。

1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於(yú)-20℃保存
，但應避免反複凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品
，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

1.         編号：将樣品對應微孔按序編号，每闆應設陰性對照2孔
、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）

 

 

2.         加樣：分别在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然後在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.         溫育
：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。  

4.         配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

5.         洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體
，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。

6.         加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.     測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。

  試(shì)驗有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

 臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

 陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者爲豚鼠輪狀病毒（RV）陰性

 陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者爲豚鼠輪狀病毒（RV）陽性

。

1．操作嚴格按照說明書進(jìn)行，本試劑(jì)不同批号組分不得混用。

2．試劑盒從(cóng)冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌(dí)液可能會(huì)有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(dí)時不影響結果。

4． 封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準，使用雙波長檢測(cè)時，參(cān)考波長爲630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。終止液爲2M的硫酸，使用時必須注意安全。

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月