2015年三月份東南大學張同學在我司代測瞭(le)人IL-24 ELISA試劑盒,現張同學的實驗課題已圓滿結束。同實驗室學生劉同學受張同學介紹昨日我司銷售部吳,準備近期同樣做人IL-24 ELISA試劑盒的課題檢測。準備收集人的細胞裂解液樣本做檢測。關於(yú)樣本的收集方法希望得到我司的。溝通結束後,我司技術部以WORD文檔形式詳細整理瞭(le)細胞裂解液的收集方法答複劉老師。劉老師也表示,樣本預計半個月左右收集完成,收集完成後将樣本交由我司進行代測。期間任何技術問題我司*時間提供。
細胞裂解液收集方法:
1).吸去培養闆内的培養基,用胰酶消化細胞,加适量培養基将細胞從(cóng)培養闆上吹下來(lái)。懸浮細胞可省略。
2).收集細胞懸液,1000×g離(lí)心10min,棄(qì)去培養基,用預冷的PBS潤洗3次。
3) .加入适量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑(jì))重懸細胞。通常6孔闆一個(gè)孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
4).将樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍(dòng),再放室溫解凍(dòng)樣品,反複凍(dòng)融幾次,使細胞充分裂解。也可将樣品進行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。
5).4℃ 10000×g 離心10min,除去細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反複(fù)凍(dòng)融。