ELISA必須遵守以下3個核心原理

酶聯免疫吸附測定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay），簡稱ELISA，是實驗室zui常用的檢測方法。 酶是能夠催化化學反應的特殊蛋白質，其催化效力超過目前所有人造催化劑。ELISA是将酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應結合起來的一種微量分析技術。酶标記抗原或抗體以後，既不影響抗原抗體反應的特異性，也不改變(biàn)酶本身的活性。因此ELISA具有準確(què)性高、檢測時間



短、價格低廉、判斷結果有客觀标準、結果便於(yú)記錄和保存等優點，适合於(yú)大批标本的檢測(cè)，廣泛應用於(yú)食品安全檢測(cè)、醫療檢測(cè)以及免疫實驗分析等領域。

核心原理

酶聯免疫吸附測定技術專題



ELISA必須遵守以下3個核心原理：1）抗原或抗體能吸附於(yú)固相載體表面，並(bìng)保持其免疫學活性；2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性；3）酶結合物與相應抗原或抗體結合後，可根據加入底物的顔色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顔色反應的深淺是與标本中相應抗原或抗體的量成正比例的，可根據已知濃度的抗原或抗體的顔色反應的深淺繪制标準曲線並(bìng)依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。在ELISA中酶起到很關鍵的作用，常用於(yú)ELISA法的酶有辣根過氧化物酶
，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過氧化物酶爲多。酶結合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯劑作用下聯結的産物,它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應，還能催化酶促反應，顯示出生物放大作用。

應用方向

酶聯免疫吸附測定技術專題

ELISA應用的範圍很廣，而且正在不斷地擴大，原則上ELISA可用於(yú)檢測(cè)一切抗原、抗體及半抗原，可以直接定量測(cè)定體液中的可溶性抗原。在實際應用方面可用於(yú)疾病的臨床診斷、疾病監察、疾病普查
、法醫檢查、獸醫及農業上的植物病害的診斷檢定等。因此，它和生物化學、免疫學、微生物學、藥理學、流行病學及傳染病學等方面密切相關
。按照待測(cè)物性質的不同，ELISA反應可以分爲抗原檢測(cè)反應及抗體檢測(cè)反應。

在醫學領域上，能夠進行檢測(cè)的抗原包括：内分泌方面的雌性激素、絨毛膜促性腺激素、黃體素、胰島素、皮質醇、促甲狀腺素和孕酮等，血液學方面的凝固因子（如第Ⅷ凝固因子）、紅細胞抗原及結合球蛋白（Hapto Globin）等，腫瘤方面已試用檢查甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA），此外還有霍亂弧菌、大腸(cháng)肝菌、綠膿杆菌和破傷風梭菌毒素；腦膜炎球菌及淋球菌抗原；檢測(cè)免疫抑制病人中常見的白色念殊菌抗原，檢測(cè)病人或病獸的糞便中的輪狀病毒；檢測(cè)甲肝病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、流感、呼吸道融合及巨細胞病毒等。

而用ELISA檢測抗體，已獲得對多種傳染病和寄生蟲病的血清學診斷，亦開始廣泛用於(yú)現場流行病學調查。在寄生蟲病方面，它用於(yú)對瘧原蟲、阿米巴
、利日曼原蟲、錐蟲、血吸蟲、囊蟲、弓漿蟲、肺吸蟲
、肝吸蟲、血絲蟲、旋毛蟲病等血清學診斷
，這對人醫和獸醫都很重要。在病原微生物方面已用於(yú)檢測鏈球菌、沙門氏菌
、布氏杆菌、結核杆菌、麻瘋杆菌、霍亂弧菌、淋球菌、假絲酵母菌等的抗體，還可用於(yú)破傷風抗毒素和霍亂弧菌抗毒素的測定以及檢測斑疹傷寒立克次氏體感染後的抗體作診斷，也可用於(yú)對立克次氏體的種屬鑒别，還有用於(yú)檢測鹦鹉熱衣原體抗體的報(bào)導。ELISA也可應用於(yú)以下病毒抗體檢測：流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風疹、輪狀病毒、疱疹病毒、巨細胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質炎病毒等，其敏感性都超過目前常用的檢測方法。此外，還可用於(yú)鑒定病毒型别，例如疱疹病毒。在免疫性疾病方面有試用作自身疫病抗體測定以及對過敏的診斷，例如檢測各種過敏原的抗體、DNA抗體及甲狀腺球蛋白抗體，紅斑性痕瘡抗體等等。在衛生學方面，可用於(yú)檢測食品中葡萄球菌腸毒素及沙門氏菌毒素等等。

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