由於(yú)在流式細胞實驗過程中，熒光抗體對單細胞懸液的标記效果直接影響實驗的數據質量 。因此，需要考慮各種影響流式抗體品質及檢測(cè)效果的因素，例如抗體特異性、熒光素信号強弱、熒光素标記方式、同型對照等 。
流式抗體的選擇 ：
1 流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇zui基本的條件：目标蛋白特異性，反應種屬以及應用實驗 。
2 流式抗體熒光标記的方式包括直接标記和間接标記兩種。在流式實驗過程中 ，盡量減少實驗工序和過程，以保證實驗的真實和準確性。因此在條件允許的範圍内，建議盡量用直接标記的抗體進行實驗而不去做間接标記。
3 流式抗體熒光标記的選擇：如果實驗中檢測單一指标 ：不同熒光标記在不同的儀器上強度不同。FACS Calibur儀器爲例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5，通常來說 ，PEzui強，适用於弱表達抗原。FITC強度較弱，适用於強表達抗原，使用範圍比較廣 。用戶需根據檢測的目标蛋白進行具體選擇。如果同時檢測多個指标：確認流式細胞儀能檢測多少個通道：流式抗體每個通道隻能選擇1種熒光素。各個通道之間的熒光素可以随意搭配 。如：實驗者同時檢測三個指标 ，可以在圖1中綠色 、黃色和紅色三個通道中各選一個适當的熒光素标記，FITC、PE和PE-cy5。切忌所有指标選擇同一個通道的熒光标記，以防止熒光的重疊和相互幹擾 ，影響zui後結果。因此，流式細胞儀的通道越多，同一份樣本能同時做的表面/胞内标志就越多。常用熒光标記包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。
同型對照的選擇：
流式細胞實驗和其他抗體相關實驗有點不同的就是需要選擇同型對照。同型對照，是用於消除由於抗體非特異性結合到細胞表面而産生的背景染色，相當於實驗的陰性對照。同型對照選擇與标記抗體同種屬來源，同亞型，同熒光标記的抗體。比如 ：抗人的CD3的PE标記的抗體 ，小鼠的IgG2a。同型對照選擇PE标記的小鼠的IgG2a。
流式抗體使用注意事項：
1、建議實驗細胞的數量和抗體的比例要适當。細胞過量或抗體過量都可能使實驗結果受影響 ，因此需要優化試驗條件。注：不同的流式技術對抗體的需求量有較大差異，例如傳統流式細胞術 （採用鞘液流系統）需要1×106個細胞爲起始上樣量，抗體用量爲10μl，而微流式細胞術 則隻需5×105個細胞，抗體用量減少到5μl。
2、直标的流式抗體應該4℃避光保存，不要冷凍。
3、盡量選擇經實驗驗證的流式抗體，以保證實驗結果。
相關參考：
流式細胞術（Flow Cytometry，FCM）：是一種對液流中排成單列的細胞或其它生物微粒（如微球，細菌，小型模式生物等）逐個進行快速定量分析和分選的技術。流式細胞術産生於上世紀六七十年代，具有速度快 、精度高、準確性好等優點，是非常*細胞定量分析技術。該技術被廣泛的應用於細胞生物學、免疫學 、血液學 、腫瘤學、藥理學、遺傳學及臨床檢驗等多個領域，如細胞周期 、細胞凋亡 、細胞活力的檢測，淋巴細胞亞群與疾病的關系研究，器官移植後的免疫學監測，腫瘤的特異性指标的檢測，藥物作用機制研究，篩選新藥等等。
流式細胞術的一般步驟：
上海恒遠專業供應ELISA試劑盒、進口血清、抗體、生物試劑等等。我司在長期的銷售實踐中形成瞭(le)*的市場優勢，産品齊全、價格合理、經營穩健、信息反饋及時、並(bìng)能随時随地享受國外供應商zui直接、zui周到、zui完善的售後服務。如果您對我司的産品感興趣，咨詢訂！
點擊交流