前言：我們實驗中 ，标本中大多數神經激素、肽類物質,以及蛋白質爲水溶性，在用於(yú)研究之前，常需固定,即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能與蛋白質的氨基反應，使蛋白質凝固，因此在醫藥上可做檢驗時的組織固定劑(jì) 、以及防腐劑(jì)等 。而在固定劑(jì)中，zui常用的是多聚甲醛。
多聚甲醛染色前固定：
做實驗的過程中，因爲排不上實驗儀器、希望标本能夠較長時間存放等等原因，很多實驗人員習慣性都會用4％多聚甲醛預先固定标本 。也有爲瞭滅活标本裏面可能存在的微生物（細菌、病毒等），起到安全保障作用；或者是做胞内染色前的準備，進行固定細胞 。
然而，可能很多人忽視瞭(le)一點 ，就是如果在染色之前用多聚甲醛固定标本，細胞表面有些位點在固定後構象發生改變，使得抗體無法結合産生假陰性，也可能由於(yú)固定作用，導緻其它位點産生非特異性結合（假陽性）。
因此 ，知道哪些抗體(tǐ)染色前不能預(yù)固定，十分重要。
多聚甲醛染色後固定：
染色後的固定，就與抗原構象關系不大瞭，更多的是熒光素 。以前4色以内的時候，用的熒光素都是非串聯的，因此大多數影響不大 ，但随著各種新型串聯染料的出現，多聚甲醛固定就成瞭問題瞭。
事實上，當您去搜索串聯染色标記（如PE-cy7、APC-cy7等）的抗體時，會發現一些比較詳細的描述裏面會注明 ，用多聚甲醛固定過的樣本，必須在4小時内檢測(cè)，否則容易導緻串聯染料降解，若要長(zhǎng)時間保存，還是需要洗滌後，轉移到不含多聚甲醛的緩沖液中。
需要注意的是，做GFP熒光檢測的同學，也需要注意一下，多聚甲醛固定也會影響GFP，多聚甲醛固定後，並(bìng)非使GFP熒光淬滅，而是使GFP蛋白構象發生改變(biàn)，無法産生熒光。有時候您固定後檢測到的熒光可能是自發熒光，或剩餘的未被改變(biàn)構象的GFP發出的。
解決方案：
1、 如果檢測的是前述表格中容易被多聚甲醛影響的分子，請盡量不要預固定，如需長期保存樣本，可以考慮凍存單個核細胞。
2、 如果檢測的是前述表格中不會受多聚甲醛影響的分子，可用1％多聚甲醛固定保存，但FSC、SSC和熒光強度影響較大。
3、 如果希望在染色後保持較長時間熒光穩定，仍建議 ：避光4度，如果仍不放心，可考慮購買商品化的适用於串聯染料的固定劑。
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