人白介素10試劑盒

人白細胞介素-10（IL-10）酶聯免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍：                                                          96T
10 ng/L -400 ng/L

使用目的：
本試劑盒用於測定人血清、血漿及相關液體樣本中白細胞介素-10（IL-10）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中人白細胞介素-10（IL-10）水平。用純化的人白細胞介素-10（IL-10）抗體包被微孔闆，制成固相抗體
，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-10（IL-10），再與HRP标記的白細胞介素-10（IL-10）抗體結合
，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的白細胞介素-10（IL-10）呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中人白細胞介素-10（IL-10）濃度。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶标試劑 6ml×1瓶 8 标準品（800ng/L） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被闆 12孔×8條 9 标準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封闆膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
标本要求
1．标本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗
。若不能馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品
，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性
。
操作步驟
1. 标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
400 ng/L 5号标準品 150μl的原倍标準品加入150μl标準品稀釋液
200 ng/L 4号标準品 150μl的5号标準品加入150μl标準品稀釋液
100 ng/L 3号标準品 150μl的4号标準品加入150μl标準品稀釋液
50 ng/L 2号标準品 150μl的3号标準品加入150μl标準品稀釋液
25 ng/L 1号标準品 150μl的2号标準品加入150μl标準品稀釋液
2. 加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。  
4. 配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體
，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹

。
6. 加酶
：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止
：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零
，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。
操作程序總結：
計算
  以标準物的濃度爲橫坐标，OD值爲縱坐标，在坐标紙上繪出标準曲線，根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式，将樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即爲樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用，酶标包被闆開封後如未用完，闆條應裝入密封袋中保存
。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差
。一次加樣時間控制在5分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做标準曲線，做複孔。如标本中待測物質含量過高（樣本OD值大於标準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書爲準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月