人幽門螺杆菌抗體IgG（HP IgG）酶聯免疫分析

人幽門螺杆菌抗體IgG(HP IgG)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

 本試劑(jì)盒僅(jǐn)供研究使用。

  規格：96T

使用目的：

本試劑盒用於(yú)測(cè)定人血清、血漿及相關液體樣本中幽門螺杆菌抗體 IgG(HP IgG)表達。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測(cè)定标本中人幽門螺杆菌抗體 IgG(HP IgG)表達。用純化的抗原包被微孔闆，制成固相抗原，可與樣品中幽門螺杆菌抗體 IgG(HP IgG)相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分後再與 HRP 标記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶标抗原複合物， 經過*洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶标儀在 450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較， 從而判定标本中幽門螺杆菌抗體 IgG(HP IgG)的存在與否。

試劑盒組成

标本要求

1. 标本採(cǎi)集後盡早進行提取
，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於(yú)-20℃保存
，但應避免反複凍融

2. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟

1. 編(biān)号：将樣品對(duì)應微孔按序編(biān)号，每闆應設陰性對(duì)照 2 孔、陽性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1

孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同）

• 加樣：分别在陰、陽性對照孔中加入陰性對照
  、陽性對照 50µl。然後在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40µl，然後再加待測(cè)樣品 10µl。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻
  ，
• 溫(wēn)育：用封闆膜封闆後(hòu)置 37℃溫(wēn)育 30 分鍾。
• 配液：将 30 倍濃縮洗滌(dí)液用蒸餾水 30 倍稀釋後備(bèi)用

5. 洗滌(dí)
：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置 30 秒後棄去，如此重複(fù) 5 次，拍幹。

6. 加酶：每孔加入酶标試(shì)劑(jì) 50µl，空白孔除外。

7. 溫(wēn)育：操作同 3。

8. 洗滌(dí)：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑(jì) A50µl，再加入顯色劑(jì) B50µl，輕輕震蕩(dàng)混勻，37℃避光顯色15 分鍾.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍(lán)色立轉黃(huáng)色）。

11. 測(cè)定：以空白空調零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應在加終止液後 15 分鍾以内進行。

人幽門螺杆菌抗體IgG(HP IgG)酶聯免疫分析計算和結果判定：

試驗有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10 臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨(lín)界值（CUT OFF）者爲幽門(mén)螺杆菌抗體 IgG(HP IgG)陰性陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨(lín)界值（CUT OFF）者爲幽門(mén)螺杆菌抗體 IgG(HP IgG)陽性

。

注意事項

1. 操作嚴格按照說明書進(jìn)行，本試劑(jì)不同批号組分不得混用。

2. 試劑盒從(cóng)冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。

3. 濃洗滌(dí)液可能會(huì)有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(dí)時不影響結果。

4. 封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染。

5. 底物請(qǐng)避光保存。

6. 試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準，使用雙波長檢測(cè)時，參(cān)考波長爲 630nm

7. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。終止液爲 2M 的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1. 試(shì)劑(jì)盒保存：；2-8℃。

2. 有效期：6 個(gè)月