小鼠白介素13試劑盒

ＥＬＩＳＡ試劑(jì)盒　ＥＬＩＳＡ檢測(cè)試劑(jì)盒　ＥＬＩＳＡ　ＫＩＴ

産品名稱：小鼠白介素13試劑盒

英文名稱(chēng)：Mouse Interleukin 13,IL-13 ELISA KIT

使用範圍：科研
産品規格：96人份/48人份
各種種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
标本齊全：血清、血漿、細胞培養上清液、組織勻漿、組織液、關節液、胸腔溢液等…
經營品牌:美國ＲＤ　ＲＢ　ＩＢＬ
保存條件
：2-8℃
有效期：６個月
運輸條件：低溫運輸
，用幹冰或者冰袋低溫運輸。

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洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟
，但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離遊離的和結合的酶标記物的目的。通過洗滌以清除殘留在闆孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性地吸附於固相載體的幹擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的幹擾物質洗滌下來。可以說在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎
。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過程如下：
（1）浸泡式 a.吸幹或甩幹孔内反應液；b.用洗滌液過洗一遍（将洗滌液注滿闆孔後，即甩去）；c.浸泡，即将洗滌液注滿闆孔，放置1-2分鍾，間歇搖動，浸泡時間不可随意縮短；d.吸幹孔内液體。吸幹應*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體後在清潔毛巾或吸水紙上拍幹；e.重複操作c和d，洗滌3-4次（或按說明規定）。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數或延長浸泡時間。微量滴定闆多採用浸泡式洗滌法
。洗滌液多爲含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合
，從而削弱蛋白質與固相載體的結合，並借助於親水基團和水分子的結合作用，使蛋白質回複到水溶液狀态，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高於0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
（2）流水沖洗式 流水沖洗法zui初用於小珠載體的洗滌，洗滌液僅爲蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗，持續沖洗2分鍾後，吸幹液體，再用蒸餾水浸泡2分鍾，吸幹即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更爲*，且也簡便、快速。已有實驗表明，流水沖洗式同樣也适用於微量滴定闆的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊闆孔表面，洗滌效果更佳。

顯色和比色
（1） 顯色
顯色是ELISA中的zui後一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的産物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素
。在一定時間内，陰性孔可保持無色，而陽性孔則随時間的延長而呈色加強
。适當提高溫度有助於加速顯色進行。在定量測定中，加入底物後的反應溫度和時間應按規定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況适當縮短或延長反應時間，及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鍾後即不再加深，再延長反應時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應應避光進行，顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD産物用硫酸終止後，顯色由橙黃色轉向棕黃色。 TMB受光照的影響不大，可在室溫中置於操作台上，邊反應觀察結果。但爲保證實驗結果的穩定性，宜在規定的适當時間閱讀結果。TMB經HRP作用後，約40分鍾顯色達，随即逐漸減弱，至2小時後即可*消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基*（SDS）等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。
（2） 比色
比色前應先用潔淨的吸水紙拭幹闆底附著的液體
，然後将闆正確放入酶标比色儀的比色架中。以軟闆爲載體的試驗，需先将闆置於标準96孔的座架中，才可進行比色。在加底物液顯色前，先将軟闆邊緣剪淨，這樣，此闆就可*平妥坐入座架中。比色時應先以蒸餾水校零點，測讀底物孔（未經任何反應僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替标本作全過程的孔），以記錄本次試驗的試劑狀況。其後可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然後進行計算。比色結果的表達以往通用光密度（oplical density，OD），現按規定用吸光度（absorbence，A），兩者含義相同。通常的表示方法是，将吸收波長寫於A字母的右下角
，如OPD的吸收波長爲492nm，表示方法爲"A492nm"或"OD492nm"。
（3） 酶标比色儀
酶标比色儀簡稱酶标儀，通常指於測讀ELISA結果吸光度的光度計。針對固相載體形式的不同，各有特制的适用於闆、珠和小試管的設計。許多試劑公司配套供應酶标儀。酶标儀的主要性能指标有：測讀速度、讀數的準確性、重複性、精確度和可測範圍、線性等等。優良的酶标儀的讀數一般可精確到0.001，準確性爲±1%，重複性達0.5%。舉例說，若某孔測得的A值爲1.083，則該孔相對於空氣的真實A值應爲1.083±0.01（1.073~1.093），重複測定數次，其A值均應1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶标儀的可測範圍視各酶标儀的性能而不同。普通的酶标儀在0.000~2.000，新型号的酶标儀上限拓寬達2.900，甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符号表示。應注意可測範圍與線性範圍的不同，線性範圍常小於可測範圍，比如某一酶标儀的可測範圍爲0.000~2.900，而其線性範圍僅0.000~2.000，這在定量ELISA中制作标準曲線時應予注意。 酶标儀不應安置在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在15~30℃，使用前先預熱儀器15-30分鍾，測讀結果更穩定。測讀A值時，要選用産物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長。有的酶标儀可用雙波長式測讀，即每孔先後測讀兩次，*次在zui适波長（W1），第二次在不敏感波長（W2），兩次測定間不移動ELISA闆的位置。例如OPD用492nm爲W1，630nm爲W2，zui終測得的A值爲兩者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光幹擾。各種酶标儀性能有所不同，使用中應詳細新聞記者說明書。

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